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手板常识

常见问题

焦糖色素中4-甲基咪唑的检测方案

4-甲基咪唑源于生产饮料所用的焦糖色素中,焦糖色素与其他人工合成色素相比,具备价格价廉、安全无毒等优点,被越来越广泛地应用于酱油、醋、可乐、冷饮等食品工业中。然而,因为焦糖色素在制造过程中往往要使用氨或铵盐,这种物质和其它原辅料发生反应,生成附带产物4-甲基咪唑。4-甲基咪唑为神经毒,能引起惊厥。长期食用会导致动物长肿瘤,有可能会对人体造成致癌风险。而据英国《每日邮报》报道,美国一公益组织检测全球多个国家的可口可乐中4-甲基咪唑的含量,发现美国355毫升可乐中4-甲基咪唑含量为4微克,中国为56微克,英国为135微克,巴西则高达267微克。

1、仪器与试剂

? ??LC-600高效液相色谱仪

? ? C18 色谱柱:150mm×4.6mm×5μm

? ? 分析天平

? ? 旋转蒸发仪

? ? 分液漏斗250ml

? ? 振荡器

? ? 针头过滤器

? ? 微孔滤膜:0.45?m

? ? 1.2试剂

? ? 甲醇(色谱纯)

? ? 无水乙醇

? ? 三氯甲烷

? ? 三氯甲烷-无水乙醇萃取液(80: 20):移取80 mL的三氯甲烷及20 mL的无水乙醇混合均匀备用

? ? 碳酸钠

? ? 碳酸钠溶液(100 g/L ):准确吸取碳酸钠100 g于1 000 mL容量瓶中,用水定容至刻度

? ? 庚烷磺酸钠

? ? 磷酸二氢钾

? ? 磷酸

? ? 磷酸二氢钾缓冲液(0.05mol/L):称取磷酸二氢钾6.8g,庚烷磺酸钠1g于1000ml容量瓶中,加水900ml,用稀磷酸调pH至3.5,用水定容至1000ml。?

? ? 4-甲基咪唑标准品:纯度>99 %o

? ? 4-甲基咪唑标准储备溶液:准确称取0. 1 000 g 4-甲基咪唑于100 mL的容量瓶中,用流动相溶解定容至刻度。4-甲基咪唑含量1. 0 mg/mL,作为贮备溶液。

2、试样溶液的制备

准确称取3g样品(精确至0. 001 g),加15mL水溶解,移入250 mL分液漏斗中,加100 g/L碳酸钠溶液15 mL,加三氯甲烷-无水乙醇萃取液60 mL,剧烈振摇5 min。静置分层后,将有机相移入另一分液漏斗中,水相再按同样方法萃取一次,合并有机相;用100 g/L碳酸钠溶液洗涤提取液3次,每次30mL。然后将有机相通过无水硫酸钠滤入旋转蒸发瓶中,50℃浓缩至近干,取下,以水溶解残渣并定容至10ml,经0.45?m微孔膜过滤后供HPLC分析。

3、色谱条件

? ? 色谱柱:C18, 4. 6 mmx250 mm,粒度5 ?m

? ? 流动相:甲醇: 0. 05 mol/L磷酸二氢钾缓冲液((pH 3.5,含0. 1%庚烷磺酸钠)=5: 95

? ? 波长:210nm

? ? 流速:1. 0 mL/min

4、样品测定

? ? 标准曲线:将4-甲基咪唑标准溶液配置成一系列标准溶液,分别进标准系列溶液各10?L,进行HPLC分析,然后以峰面积为纵坐标,以4-甲基咪唑的含量为横坐标,绘制标准曲线。

? ? 样品测定:吸取10 ?L试样溶液进行HPLC分析,测定其峰面积,从标准曲线查得测定液中4-甲基咪唑的含量。

5、4-甲基咪唑的标准色谱图

?

6、仪器配置:

型号名称

配置

数量

?

液相色谱仪LC-600

(智能全控)

P600恒流泵(0.001~9.999ml/min???

UV600紫外检测器(190~700nm

Rehodyne7725I手动进样阀

20uL定量环(美国)

工具包

1台

1台

1只

1只

1套

液相色谱柱

250×4 .6,5um ??C18进口

1

色谱工作站(可反控主机)

?

1

JL-120DTH超声波清洗器

3L

1

KJ330色谱柱温箱

?

1

溶剂过滤器(真空泵)

?

1

滤膜、滤器

有机、水系0.45

1

50ul进样器

?

1

电脑、打印机

?

1

振荡器

?

1

电子天平

?

1

旋转蒸发器

?

1

分液漏斗250ml

?

1

标准溶液

?

1

?

?

?



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