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手板常识

常见问题

11种四环素类抗生素的检测方案

四环素】

四环素类抗生素(Tetracyclines)是由放线菌产生的一类广谱抗生素,包括金霉素(Chlotetracycline)、土霉素(Oxytetracycline)、四环素(Tetracycline)、及半合成衍生物甲烯土霉素、强力霉素、二甲胺四环素等,其结构均含并四苯基本骨架;广泛用于多种细菌及立克次氏体、衣原体、支原体等所致之感染。四环素类抗生素在酸性和碱性条件下均不稳定,四环素类药物中含有许多羟基、烯醇羟基及羰基,在中性条件下能与多种金属离子形成不溶性螯合物。与钙或镁离子形成不溶性的钙盐或镁盐,与铁离子形成红色络合物,与铝离子形成黄色络合物。在体内Tetracyclines药物与钙离子形成的络合物呈黄色沉积在骨骼和牙齿上,小儿服用会发生牙齿变黄,孕妇服用后其产儿可能发生牙齿变色,骨骼生长抑制。因此小儿和孕妇对此药因慎用或禁服。

关于国家标准中四环素的检出限:

——动物源性食品中四环素(二甲胺四环素、土霉素、四环素、去甲基金霉素、金霉素、美他环素及多西环素)的检出限——50?g/kg;

——化妆品中四环素的检出限:

二甲胺四环素—25mg/kg ?定量限:50mg/kg

土霉素、四环素、去甲基金霉素——10mg/kg ?定量限:25mg/kg ? ? ?

金霉素、美他环素、多西环素——5mg/kg ? ? 定量限:10mg/kg?

脱水四环素、差向脱水四环素——2.5mg/kg ? 定量限:5mg/kg?

——牛奶及奶粉中土霉素、四环素、金霉素、多西环素的检出限:

牛奶中:土霉素、四环素——5?g/kg

? ? ? ? 金霉素、多西环素——10?g/kg

奶粉中:土霉素、四环素——25?g/kg

? ? ? ? 金霉素、多西环素——50?g/kg

本方案分离检测的11种四环素类抗生素:二甲胺四环素(MINO)、土霉素(OTC)、四环素(TC)、差向四环素(ETC)、金霉素(CTC)、差向金霉素(MCTC )、脱水四环素(ATC)、差向脱水四环素(ETAC)、甲烯土霉素(MTC)、去甲基金霉素(DMCTC)、多西环素(DC)。

【样品处理过程】

动物肝脏、肾脏、肌肉组织及水产品:称取均匀式样5g(精确到0.01g),置50mL聚丙烯离心管中,分别用20mL、20mL、10mL 0.1mol/L EDTA-Mcllvainc 缓冲溶液冰水浴超声提取三次,每次漩涡混匀1min,超声提取10min,3000r/min离心10min(温度低于15℃),合并上清液(控制总提取液的体积不超过50mL),定容至50mL,混匀,5000r/min离心10min(温度低于15℃),用快速滤纸过滤,待净化。

净化:准确吸取10mL提取液(相当于1g样品)以1滴/s的速度过HLB固相萃取柱,待样液完全流出后,依次用5mL水和5mL甲醇-水淋洗,弃去全部流出液。2.0Kpa以下减压抽干5min,最后用10mL甲醇+乙酸乙酯洗脱。将全部洗脱液氮吹干(温度低于40℃),用适量的甲醇溶解残渣,过0.45?m滤膜,待测定。

【色谱条件】

色谱柱:C18, ?4.6 mm*250 mm,粒度5 ?m

检测波长:350nm

检测温度:室温

? ?速:1mL/min

: ?A:乙腈 ? ?B:0.01moL/L草酸水溶液;梯度洗脱;

【谱图】

?

1-MINO, 2-ETC, 3-OTC, 4-TC, 5-DMCTC, 6-MCTC, 7-CTC, 8-MTC, 9-DC, 10-EATC, 11-ATC

?

【仪器配置】

?

型号名称

配置

数量

?

液相色谱仪LC-600

(智能全控)

P600恒流泵(0.001~9.999ml/min???

UV600紫外检测器(190~700nm

Rehodyne7725I手动进样阀

20uL定量环(美国)

梯度混合器

工具包

2台

1台

1只

1只

1只

1套

液相色谱柱

250×4 .6,5um ??C18进口

1

色谱工作站(可反控主机)

?

1

JL-120DTH超声波清洗器

3L

1

KJ330色谱柱温箱

?

1

溶剂过滤器(真空泵)

?

1

滤膜、滤器

有机、水系0.45

1

25ul进样器

?

1

电脑、打印机

?

1

振荡器

?

1

电子天平

?

1

氮吹仪

?

1

固相萃取装置

?

1

可调移液器100ul-1000ul(含吸头)

?

1

标准溶液

?

1

?



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